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基因工程操作中涉及一系列相互关联的酶促反应。已经知道有许多重要的核酸酶,如限制性内切核酸酶、外切核酸酶 、DNA连接酶、DNA聚合酶、反转录酶 、DNA及RNA的修饰酶等,在基因工程的操作中有着广泛的用途。
1.限制性内切核酸酶
限制性内切核酸酶(restrictionendonuclease)是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列 ,并在合适的条件下使每一条链一定位点上的磷酸二酯键断开,产生具有3/—OH基团和5/—P基团的DNA片段的内切脱氧核糖核酸酶(endo-deoxyribonuclease) 。至今发现的限制性内切核酸酶有I型酶、Ⅱ型酶和Ⅲ型酶,它们各具特性。基因工程中所说的限制性内切核酸酶都是指Ⅱ型酶。
限制性内切核酸酶把目的基因从只有四种碱基A、T 、G、C组成的DNA长链(人类DNA长度为3X109个碱基对)中准确地剪切下来 。每一种限制性内切核酸酶的识别位点是固定的 ,如EcoRI的识别位点是GAATTC及其互补序列CTTAAG。
1968年,沃纳·阿尔伯博士、丹尼尔·内森斯博士和汉密尔·史密斯博士第一次从大肠杆菌中
提取出限制性内切核酸酶。该酶能够在DNA上寻找到特异的“切点”,认准后将DNA分子的双链交错地切断。至今人们已经分离提取出400多种限制性内切核
酸酶 。目前 ,人们可以从复杂的生物有机体基因组中,经过限制性内切核酸酶酶切消化等步骤,分离出目的基因。因其能够特异地切割DNA分子 ,人们常形象的将
其比作“分子剪刀 ”。
2.DNA连接酶
DNA连接酶能够催化具有3/—OH基团和5/—P基团的DNA片段之间形成磷酸二酯键 。在基因克隆中用来连接目的基因与载体。
3.DNA聚合酶
DNA聚合酶可以使单核苷酸通过磷酸二酯键加在寡核苷酸的3/—OH端,在基因克隆中用来补平缺口。尤其是具有耐热性质的DNA聚合酶的分离极大促进了基因等DNA片段的体外合成与扩增技术的发展 。
4.反转录酶
反转录酶以RNA为模板合成DNA,即eDNA(complementaryDNA ,互补DNA)。在基因克隆中常用来构建eDNA文库。
以上各种酶的发现和应用才使基因工程技术成为可能 。
问题一:基因工程中使用的载体有哪些 基因工程载体:
在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种常用的载体是质粒 、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒,最常用的是质粒。
用途:
在基因操作过程中使用运载体有两个用途:一是用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制 。
基因工程中载体需要满足的条件:
1有一个或多个限制酶的切点,便于目的基因插入
2有自我复制能力或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA复制的能力
3必须带有标记基因 ,以便筛选
4对受体细胞无害
5大小合适,便于操作
天然质粒并不完全具备上述条件,所以都要进行人工改造。
希望对你有帮助~
问题二:基因工程常用的载体有哪些?作为基因工程的载体 ,应具备什么特点 1)具有一个或多个限制酶切点,以供外源基因插入其中; 2)具有标记基因,以鉴定重组是否进入受体细胞; 3)能自我复制,否则可能导致重组丢失; 4)对受体细胞无害; 5)大小应适合,以便提取和在体外进行操作,太大不便操作.
问题三:基因工程需要哪些常见载体,都具有什么抗性? 有真核的,如:pEGFP-N1(卡那抗性)、pCMV-myc(氨苄抗性)、pCDNA系列 、pBUDCE4(博来霉素抗性)
原核表达载体如:pGEX系列(pGEX-5X-3、pGEX-4T-1等 ,一般是氨苄抗性)、pET系列(有氨苄的有卡那的)
还有原核、真核都表达的穿梭载体,看你要什么样的了
问题四:基因工程使用的载体有哪些? 细菌的质粒,λ噬菌体的衍生物 ,某些灭活的病毒,新型的还有某些叶绿体或线粒体DNA等
问题五:基因工程中使用的载体有哪些 基因工程载体:
在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种常用的载体是质粒 、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒,最常用的是质粒。
用途:
在基因操作过程中使用运载体有两个用途:一是用它作为运载工具 ,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制 。
基因工程中载体需要满足的条件:
1有一个或多个限制酶的切点,便于目的基因插入
2有自我复制能力或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA复制的能力
3必须带有标记基因,以便筛选
4对受体细胞无害
5大小合适,便于操作
天然质粒并不完全具备上述条件 ,所以都要进行人工改造。
希望对你有帮助~
问题六:基因工程常用的载体有哪些?作为基因工程的载体,应具备什么特点 1)具有一个或多个限制酶切点,以供外源基因插入其中; 2)具有标记基因,以鉴定重组是否进入受体细胞; 3)能自我复制,否则可能导致重组丢失; 4)对受体细胞无害; 5)大小应适合,以便提取和在体外进行操作,太大不便操作.
问题七:常用的基因载体有哪些?载体必须满足哪些条件 基因工程载体:
在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒,最常用的是质粒 。
用途:
在基因操作过程中使用运载体有两个用途:一是用它作为运载工具 ,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。
基因工程中载体需要满足的条件:
1有一个或多个限制酶的切点,便于目的基因插入
2有自我复制能力或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA复制的能力
3必须带有标记基因,以便筛选
4对受体细胞无害
5大小合适 ,便于操作
天然质粒并不完全具备上述条件,所以都要进行人工改造。
问题八:基因工程需要哪些常见载体,都具有什么抗性? 有真核的 ,如:pEGFP-N1(卡那抗性)、pCMV-myc(氨苄抗性) 、pCDNA系列、pBUDCE4(博来霉素抗性)
原核表达载体如:pGEX系列(pGEX-5X-3、pGEX-4T-1等,一般是氨苄抗性) 、pET系列(有氨苄的有卡那的)
还有原核、真核都表达的穿梭载体,看你要什么样的了
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