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基因工程基本操作步骤,需要经历四步。目的基因获取→基因表达载体构建→目的基因导入受体细胞→目的基因检测与鉴定。
基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术,是以分子遗传学为理论基础 ,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图,在体外构建杂种DNA分子 ,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的遗传技术 。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。
基因工程的四个基本步骤
基因工程是一次非常复杂的技术操作。它的环节之繁多 、操作之细致是其他工程所无法比拟的 。但是如果跳开细节问题,基因工程操作流程还是比较明了的。它的基本步骤大致可归纳如下:
第一步:制备所需的基因
所谓目的基因就是人们依据工程设计中所需要的某些DNA分子的片段。它含有一种或几种遗传信息的全套遗传密码。DNA的种类繁多 ,每个DNA分子所包含的基因也很多,但它在细胞内的含量却很少 。因此,要获得一定量的目的基因 ,是一件十分复杂的细致工作。目前采用的分离、合成目的基因的方法有多种。
第二步:选择基因载体
在基因工程中必须把外源基因转移到宿主细胞中去 。要实现这种基因转移,还需要一种合适的运转基因的载体。理想的载体要具备有如下条件:能够自我复制;大小要适度,能从外部进入细胞;稳定安全可靠;要有遗传标记和选择性的识别标记。通常选用的基因载体有三类:一类是细菌质粒 。另一类是噬菌体和病毒。再有一类载体就是转座因子、人造粘接体等。它们的主要成分都是不同的脱氧核糖核酸 。
第三步:基因转移
把所取得的基因引入细胞的方法随接受这基因的细胞的不同而不同。接受基因的细胞可以大致分为三类:以细菌和酵母菌为主的微生物;人 、家畜和实验动物的细胞和植物细胞。
转化是把基因引入微生物细胞的常用方法 。转化是细菌在特定的生理状态下摄入DNA的过程。一种称为电击穿孔的方法则较少依赖于细菌的生理状态 ,把细菌悬浮在电场中,短时间的通电能使细胞膜破损而令DNA进入细胞中去。
第四步:外来基因的检出
无论哪一种导入DNA的方法都会带来接受外来DNA的细胞的死亡,在活下来的细胞中也总是只有一小部分真正接受了外来的DNA。因此必须有一种方法来检出这些细胞 。
最常用的办法是用一个抗药性质粒作为基因载体。如果说质粒上有一个抗氯霉素基因,那么把经转化处理的细菌接种在含氯霉素的固体培养基上 ,在这上面长出来的菌落必然由含有这一质粒的细菌所长成。不过这样检出的细菌固然含有这一质粒,质粒上却未必运载着外来的基因,因为经过限制酶切的质粒可以通过自身的两个酶切末端的连接而成为不带有任何外来DNA的质粒 ,而这样的质粒同样可以通过转化进入细菌细胞而使它们对氯霉素具有抗性 。
目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞 、目的基因的检测与鉴定。
生物工程,是20世纪70年诞生的一门新兴的综合性应用学科,包括四大工程 ,即基因工程、细胞工程、发酵工程 、酶工程,其中基因工程在人们生产生活中尤为重要。
基因工程,又称为DNA重组技术 ,是以分子遗传学为理论基础,运用分子生物学和微生物学为手段,将不同来源的基因按预先的设计 ,在细胞体外构建杂种DNA分子,然后导入受体细胞,以改变生物原有的遗传特性,获得人类所需要的新品种 。
基因工程的利弊
遗传疾病乃是由于父或母带有错误的基因。基因筛检法可以快速诊断基因密码的错误;基因治疗法则是用基因工程技术来治疗这类疾病。
产前基因筛检可以诊断胎儿是否带有遗传疾病 ,这种筛检法甚至可以诊断试管内受精的胚胎,早至只有两天大,尚在八个细胞阶段的试管胚胎 。做法是将其中之一个细胞取出 ,抽取DNA,侦测其基因是否正常,再决定是否把此胚胎植入母亲的子宫发育。胎儿性别同时也可测知。
广泛的基因筛检将会引起一连串的社会问题 。虽然基因筛检可帮助医生更早期更有效地治疗病人 ,但可能妨碍他的未来生活就业。基因工程会产生“杀虫剂”的作物,也可能对大环境有害,它们或许会杀死不可预期的益虫 ,影响昆虫生态的平衡。
转基因食品不同于相同生物来源之传统食品,遗传性状的改变,将可能影响细胞内之蛋白质组成 ,进而造成成份浓度变化或新的代谢物生成,其结果可能导致有毒物质产生或引起人的过敏症状,甚至有人怀疑基因会在人体内发生转移,造成难以想象的后果。
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