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高考生物选修三知识1

基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的获取

1. 目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 
。

2. 原核基因采取直接分离获得
，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用 方法 有反转录法和化学合成法 。

3. PCR技术扩增目的基因

(1)PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术
。

(2)目的：获取大量的目的基因

(3)原理：DNA双链复制

(4)过程：

第一步：加热至90～95℃DNA解链为单链;

第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合;

第三步：加热至70～75℃ ，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。

(5)特点：指数(2n)形式扩增

第二步：基因表达载体的构建(核心)

1. 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在
，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用 。

2. 组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因

(1)启动子：是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的首端
，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA ，最终获得所需的蛋白质
。

(2)终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 
，位于基因的尾端。

(3)标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来 。常用的标记基因是抗生素基因
。

第三步：将目的基因导入受体细胞

1. 转化的概念：是目的基因进入受体细胞内 ，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

2. 常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等 。

将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。方法的受体细胞多是受精卵
。

将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞
、遗传物质相对较少
，最常用的原核细胞是大肠杆菌 ，其转化方法是：

先用Ca2+处理细胞 ，使其成为感受态细胞 
，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子 ，完成转化过程。

3. 重组细胞导入受体细胞后
，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达 。

第四步：目的基因的检测和表达

1. 首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交(DNA-DNA)技术
。

2. 其次还要检测目的基因是否转录出mRNA ，方法是采用分子杂交(DNA-RNA)技术。

3. 最后检测目的基因是否翻译成蛋白质
，方法是采用抗原—抗体杂交技术 。

4. 有时还需进行个体生物学水平的鉴定
。如生物抗虫或抗病的鉴定等。

高考生物选修三知识2

基因工程

基因工程：是指按照人们的愿望，进行严格的设计 ，通过体外DNA重组和转基因技术
，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的 ，又叫做DNA重组技术
。

(一)基因工程的基本工具

1. “分子手术刀 ”——限制性核酸内切酶(限制酶)

(1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

(2)功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开
，因此具有专一性 。

(3)结果：

经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端
。

2. “分子缝合针
”——DNA连接酶

(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较：

①相同点：都缝合磷酸二酯键。

②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端 ，但连接平末端的之间的效率较低 。

(2)与DNA聚合酶作用的异同：

DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端
，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键
。

3. “分子运输车”——载体

(1)载体具备的条件：

①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点 ，供外源DNA片段插入 。

③具有标记基因
，供重组DNA的鉴定和选择
。

(2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的 、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

(3) 其它 载体：λ噬菌体的衍生物
、动植物病毒 。

高考生物选修三知识3

基因工程的应用

1. 植物基因工程：抗虫、抗病 、抗逆转基因植物 ，利用转基因改良植物的品质
。

2. 动物基因工程：提高动物生长速度
、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。

3. 基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内
，使该基因表达产物发挥作用 。

4. 基因诊断：又称为DNA诊断，是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病原体
。

蛋白质工程的概念

蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础 ，通过基因修饰或基因合成
，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质 ，以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质)

蛋白质工程的基本途径：

从预期的蛋白质功能出发

设计预期的蛋白质结构

推测应有的氨基酸序列

找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)

高考生物选修三知识4

细胞工程

(一)植物细胞工程

1. 理论基础(原理)：细胞全能性

全能性表达的难易程度：受精卵>生殖细胞>干细胞>体细胞;植物细胞>动物细胞

2. 植物组织培养技术

(1)过程：离体的植物器官 、组织或细胞→愈伤组织→试管苗→植物体

(2)用途：微型繁殖
、作物脱毒、制造人工种子 、单倍体育种
、细胞产物的工厂化生产 。

(3)地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序
。

(二)动物细胞工程

1. 动物细胞培养

(1)概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞
，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。

(2)动物细胞培养的流程：取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组

织)→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养 。

(3)细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 ，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多
，当贴壁细胞分裂生长到表 面相 互抑制时，细胞就会停止分裂增殖 ，这种现象称为细胞的接触抑制
。

(4)动物细胞培养需要满足以下条件

①无菌 、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素
，以防培养过程中的污染 。此外，应定期更换培养液 ，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害
。

②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸
、促生长因子、无机盐 、微量元素等。通常需加入血清
、血浆等天然成分 。

③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃;pH：7.2～7.4
。

④气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的
，CO2的主要作用是维持培养液的pH 。

(5)动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体 、检测有毒物质
、培养医学研究的各种细胞
。

2. 动物体细胞核移植技术和克隆动物

(1)哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难)。

(2)选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作;卵(母)细胞细胞质多 ，营养丰富 。卵细胞的细胞质可使体细胞细胞核全能性得到表达
。

(4)体细胞核移植技术的应用：

①加速家畜遗传改良进程
，促进良畜群繁育;

②保护濒危物种，增大存活数量;

③生产珍贵的医用蛋白;

④作为异种移植的供体;

⑤用于组织器官的移植等。

(5)体细胞核移植技术存在的问题：克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等 。

3. 动物细胞融合

(1)动物细胞融合也称细胞杂交 ，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞
。

(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同
，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇 、灭活的病毒
、电刺激等。

(3)动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性 ，成为研究细胞遗传、细胞免疫 、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段 。

4. 单克隆抗体

(1)抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
。从血清中分离出的抗体产量低
、纯度低、特异性差。

(2)单克隆抗体的制备过程：

两次筛选：第一次筛选出杂交瘤细胞
，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 。

(3)杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体
。

(4)单克隆抗体的优点：特异性强 ，灵敏度高
，并能大量制备。

(5)在腹腔内增殖的优点：不需要特定的培养基，不需要严格的外界条件 。

(6)筛选的时候用：特定的选择性培养基进行筛选
。

高考生物选修三知识5

胚胎工程

3.1 体内受精和早期胚胎发育

胚胎工程：是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术 ，如胚胎移植 、体外受精、胚胎分割
、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎
，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求 。

胚胎工程的许多技术 ，实际是在体外条件下
，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作
。

3.2 体外受精和早期胚胎培养

试管动物技术：通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎(桑葚胚或囊胚)后 ，再经移植产生后代的技术。

3.3 胚胎工程的应用及前景

生物技术的安全性和伦理问题

(一)转基因生物的安全性争论 ：

(1)基因生物与食物安全：

反方观点：反对“实质性等同 ”、出现滞后效应 、出现新的过敏原
、营养成分改变

正方观点：有安全性评价、科学家负责的态度 、无实例无证据

(2)转基因生物与生物安全：对生物多样性的影响

反方观点：扩散到 种植 区之外变成野生种类
、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体 、成为超级杂草
、有可能造成“基因污染
”

正方观点：生命力有限、存在生殖隔离 、花粉传播距离有限
、花粉存活时间有限

(3)转基因生物与环境安全：对生态系统稳定性的影响

反方观点：打破物种界限、二次污染 、重组出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通过食物链进入人体

正方观点：不改变生物原有的分类地位
、减少农药使用、保护农田土壤环境

(二)生物技术的伦理问题

(1)克隆人：两种不同观点，多数人持否定态度 。

否定的理由：克隆人严重违反了人类伦理道德
，是克隆技术的滥用;克隆人冲击了现有的婚姻 、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念;克隆人是在人为的制造在心理上和社会地位上都不健全的人。

肯定的理由：技术性问题可以通过胚胎分级
、基因诊断和染色体检查等方法解决
。不成熟的技术也只有通过实践才能使之成熟。

中国政府的态度：禁止生殖性克隆，不反对治疗性克隆 。四不原则：不赞成、不允许 、不支持
、不接受任何生殖性克隆人的实验
。

(2)试管婴儿：不同观点 ，多数人持认可态度。

否定的理由：把试管婴儿当作人体零配件工厂
，是对生命的不尊重;早期生命也有活下去的权利，抛弃或杀死多余胚胎 ，无异于“谋杀” 。

肯定的理由：解决了不育问题
，提供骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法，提供骨髓造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤
。

(3)基因身份证：

否定的理由：个人基因资讯的泄漏造成基因歧视 ，势必造成遗传学失业大军 、造成个人婚姻困难
、人际关系疏远等严重后果。

肯定的理由：通过基因检测可以及早采取预防 措施 
，适时进行治疗，达到挽救患者生命的目的 。

(三)生物武器

(1)种类：致病菌、病毒 、生化毒剂 ，以及经过基因重组的致病菌
。

(2)散布方式：吸入
、误食、接触带菌物品 、被带菌昆虫叮咬等。

(3)特点：致病力强、多数具传染性
、传染途径多、污染面广 、有潜伏期
、不易被发现、危害时间长等 。

(4)禁止生物武器公约及中国政府的态度

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基因工程是一次非常复杂的技术操作
。它的环节之繁多 、操作之细致是其他工程所无法比拟的。但是如果跳开细节问题
，基因工程操作流程还是比较明了的 。它的基本步骤大致可归纳如下：

第一步：制备所需的基因

所谓目的基因就是人们依据工程设计中所需要的某些DNA分子的片段。它含有一种或几种遗传信息的全套遗传密码
。DNA的种类繁多，每个DNA分子所包含的基因也很多 ，但它在细胞内的含量却很少。因此，要获得一定量的目的基因
，是一件十分复杂的细致工作 。目前采用的分离
、合成目的基因的方法有多种
。

第二步：选择基因载体

在基因工程中必须把外源基因转移到宿主细胞中去。要实现这种基因转移，还需要一种合适的运转基因的载体 。理想的载体要具备有如下条件：能够自我复制；大小要适度 ，能从外部进入细胞；稳定安全可靠；要有遗传标记和选择性的识别标记
。通常选用的基因载体有三类：一类是细菌质粒。另一类是噬菌体和病毒 。再有一类载体就是转座因子、人造粘接体等
。它们的主要成分都是不同的脱氧核糖核酸。

第三步：基因转移

把所取得的基因引入细胞的方法随接受这基因的细胞的不同而不同 。接受基因的细胞可以大致分为三类：以细菌和酵母菌为主的微生物；人 、家畜和实验动物的细胞和植物细胞
。

转化是把基因引入微生物细胞的常用方法。转化是细菌在特定的生理状态下摄入DNA的过程 。一种称为电击穿孔的方法则较少依赖于细菌的生理状态
，把细菌悬浮在电场中，短时间的通电能使细胞膜破损而令DNA进入细胞中去。

第四步：外来基因的检出

无论哪一种导入DNA的方法都会带来接受外来DNA的细胞的死亡 ，在活下来的细胞中也总是只有一小部分真正接受了外来的DNA
。因此必须有一种方法来检出这些细胞。

最常用的办法是用一个抗药性质粒作为基因载体 。如果说质粒上有一个抗氯霉素基因
，那么把经转化处理的细菌接种在含氯霉素的固体培养基上，在这上面长出来的菌落必然由含有这一质粒的细菌所长成
。不过这样检出的细菌固然含有这一质粒 ，质粒上却未必运载着外来的基因
，因为经过限制酶切的质粒可以通过自身的两个酶切末端的连接而成为不带有任何外来DNA的质粒，而这样的质粒同样可以通过转化进入细菌细胞而使它们对氯霉素具有抗性。

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